最近，爱思唯尔（Elsevier）著名的分析化学杂志AnalyticaChimicaActa（IF：5.977）在线发表了上海交通大学系统生物医学研究所陶胜策团队的最新研究成果，即“基于Hive-ChipandDirectLoop-AmplI的基于热猪瘟病毒的多重视觉检测”。 ;。基于“蜂巢芯片”，和“ LAMP直接扩增法”，该研究提出了用于并行检测非洲猪瘟病毒多基因的全过程计划。它不需要核酸提取，不依赖精密仪器，并且避免了单一病毒。由基因突变，高灵敏度，高特异性，视觉检测以及适用于POCT（即时检验，即时检验/即时检验）等优点引起的假阴性问题。该研究还申请了相关专利“靶基因组合在检测非洲猪瘟病毒中的应用和试剂盒”。非洲猪瘟（Africanswinefevervirus，ASFV）是由非洲猪瘟病毒（Africanswinefevervirus，ASFV）引起的一种急性，高度传染性和致死性的猪病，死亡率高达100％。截至2020年3月5日，中国32个省共发生165次非疫情暴发，共淘汰了1,193,000头猪，对中国乃至世界的养猪业构成了巨大威胁。 ASFV是具有二十面体对称性的dsDNA病毒，具有巨大的基因组（170〜190kb）。由于其复杂的基因组成和高变异性，已根据编码衣壳蛋白VP72的较高同源性基因B646L进行分类。共有24个基因型。目前，尚无针对ASF的有效治疗方法和疫苗。扑杀和焚烧是防止流行病传播的最有效手段。因此，快速准确地检测ASFV非常重要。现有的ASFV核酸检测方法存在两个主要问题：仅检测ASFV单基因，并依赖于复杂的仪器。针对问题1，本研究首先基于ASFV序列比对结果获得了5个保守基因（B646L，B962L，C717R，D1133L，G1340L），并设计了4套LAMP（环介导的等温扩增，环介导的等温扩增）。 ）的每个基因。通过In-tubeLAMP和On-ChipLAMP测试了等温扩增引物的有效性，特异性和敏感性，并获得了一套可用于ASFV多基因检测的LAMP引物。避免由单个基因突变引起的假阴性结果，并提高阳性检测率；对于第二个问题，本研究采用物理隔离策略，通过PDMS（聚二甲基硅氧烷）基质整合10个毛细管。所述“蜂窝状芯片”被称为“蜂窝芯片”。类似于团块，并经过疏水改性。对应于不同基因的LAMP引物固定在每个毛细管中。借助衔接子和毛细管现象，将样品同时分散在每个毛细管中，进行等温扩增和荧光检测，一次反应即可同时检测多个基因，LAMP直接扩增法消除了核酸。酸提取步骤。基于此，研究小组成员成功测试了猪血模拟样品和ASFV基因组DNA样品，并使用了其他猪病毒基因组DNA样品（包括猪伪狂犬病病毒PRV，2型猪圆环病毒PCV2和猪细小病毒PPV）进行了特定测试。为了进一步证明ASFV多基因检测的必要性，研究小组成员将现有的ASFV菌株（GenBank：EF121429.1，MH025920.1，KM111295.1，MH025919.1）引入了B646L基因质粒中的点突变，并芯片测试结果发现该位点（第1号毛细管）为阴性，而其他毛细管为阳性，表明如果此时仅检测到B646L基因，将产生假阴性结果。总而言之，这项研究开发了一种针对ASFV的通用多核酸检测平台，尤其是针对各种病原体（例如新型冠状病毒）的核酸检测平台。它可以通过单个反应检测多个基因，无需依赖复杂的仪器和专业操作即可实现多个视觉检测，适用于港口检验和检疫以及现场实时检验。该研究的第一作者是上海交通大学的2017年博士生朱元寿，对应的作者是上海交通大学的陶胜策研究员和北京博ao生物学的张岩博士。