尺寸排阻色谱(SEC)方法通常是根据分子大小分离分子量大于2000的物质的技术。作为液相色谱技术的重要分支,最广泛使用的SEC方法是确定合成聚合物的分子量分布;对于一些大分子样品如蛋白质,核酸等,也是一种非常有效的分离和纯化手段。 SEC方法允许简单且快速地分离样品组分之间的分子量差异的简单混合物。它是初步探测和分离未知样品的理想选择,无需复杂实验即可获得样品组成分布的全面概述。根据其漂洗系统,SEC方法通常分为两大类,即水相SEC(也称为凝胶过滤色谱法)和有机相SEC(也称为凝胶渗透色谱法)。虽然两种方法的分离原理相同,但柱填料及其分离对象和使用技术完全不同。与其他几种色谱分离方式相比,尺寸排阻色谱具有以下几个突出的优点:(1)快速峰,任何组分的保留体积在K和%之间; (2)溶质和固定相(填料和流动相之间没有相互作用,不需要梯度洗脱;(3)分离过程中柱上没有杂质或残留物,因此色谱柱寿命长;( 4)对于大分子,可以测定分子量和分子量分布;(5)对于生物大分子,活性回收率高;(6)柱负荷大,有利于制备和分离。分离方法,它也有其难以克服的缺点。即,与其他色谱模式相比,体积排阻色谱的分离度和峰容量相对较低。在SEC过程中,色谱柱填料的性质必须匹配溶质和浸出系统。待分离的聚合物样品可以是油溶性的或水溶性的。前者只能在有机相体系中分离。后者只能在水溶液中分离出来ase系统,填充剂必须通过淋洗液渗透。 SEC方法要求填料和样品尽可能不与任何组相互作用,即应尽量避免非空间排斥效应(如吸附,离子交换,分布等)的影响尽可能在色谱过程中。完全根据分子大小进行分离。填料的多孔结构是SEC方法所基于的基础。孔隙结构参数(例如孔径,孔径,孔径分布和孔结构形态)对于SEC技术尤其重要。一种高效的SEC填料,其化学结构应能很好地适应待分离的物体和漂洗系统,并能有效避免非空间排斥;其物理结构具有均匀适宜的粒度。还需要光滑的表面(包括孔壁的表面),规则和无阻碍的孔结构,大的εL度,以及合适的孔径和分布。除上述色谱柱效率,选择性,分离度和渗透性参数外,SEC填料的色谱表征必须满足以下三个色谱指数要求。排除限制表明填料可用于分离聚合物材料的最大质量。超过该限度,溶质将在填料的孔之间通过而不分离。排除限制主要取决于填料的最大有效孔径。分离范围表明填料可以分离高分子物质的分子量范围。它通常是指分离柱的分子量的线性部分和洗脱体积校准曲线。分子量高于和低于该范围的溶质分别被排除和渗透,没有分离效果。分离范围主要取决于填料的有效孔的分布。对于聚合物型SEC填料,分离范围通常是两个数量级不同的分子量。固体流量比是指填料的有效溶质L内部体积与填料的颗粒间隙体积之比。它反映了色谱柱的分离能力,值越大越好。在紧密堆积的条件下,固体流动主要与填料的孔隙率有关。以上不仅是制备过程中填料的主要研究内容,也是填料在应用过程中的重要参考。